Cryo/SEM, au plus proche de l’état natif.

P.Bomme¹, A.Mallet¹, C. Inizan², A.Sartori¹, MI. Thoulouze², J. Krijnse-Locker¹
1- Institut Pasteur Paris, Ultrapole
2- Institut Pasteur Paris, Unité de Virologie structurale

L’étude par Microscopie Electronique à Balayage (MEB) d’échantillon d’origine biologique, composé à 98% d’eau, nécessite plusieurs étapes de préparation induisant de nombreux artefacts. Le cryo-MEB est la seule méthode permettant de limiter les modifications morphologiques se produisant lors des cycles de déshydratation et de dessiccation.

Ces dernières années, la combinaison des différentes méthodes d’imagerie et notamment entre la microscopie optique à fluorescence (FLM) et la microscopie électronique (EM) est en pleine essor. Ces méthodologies appelées CLEM « Correlative Light and Electron Microscopy » sont de réels challenges technologiques permettant l’étude d’un évènement rare et/ou dynamique par FLM à l’échelle nanométrique par EM.

Basé sur nos applications principalement tournées vers l’étude des interactions hôte-pathogène, nous avons développé une nouvelle méthode CLEM combinant la microscopie optique à fluorescence et le cryo-MEB. Cette méthodologie est la seule nous permettant d’étudier la morphologie et l’architecture de structure très hydratée telle que les biofilms viraux.